胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構成的肽鏈,是一種重要的消 化酶。 胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯鍵，生成 BA，BA 在 253nm 處有吸收峰，通過測定 253nm 吸光度增加速率，即可計算出胰蛋白酶的活性。
胰蛋白酶測定試劑盒的測定步驟：
1. 分光光度計預熱30 min，調節(jié)波長到555 nm，蒸餾水調零。
2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑一(V)：試劑二(V)：蒸餾水(V)：試劑三(V)=1 mL：1 mL：5.4 mL：0.4 mL的比例充分混合。(注意：現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，在空瓶中配制，試劑盒中帶有4個空瓶)
3. 吸取25μL樣本，加入975 μL工作液，混勻后立即測定，記錄555nm下1min時的吸光值A1和2min時的吸光值A2。計算△A=A1-A2
注 意：
1、如果△A小于0.005，可將反應時間延長到5min。如果△A大于0.5，體系迅速變色，可將樣本用提取液稀釋后測定(建議稀釋10倍)，計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
2、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩(wěn)定。
3、實驗時要使底物避光保存。
