細(xì)胞涂片，通常需要固定和染色以便進(jìn)行細(xì)胞鑒定和計(jì)數(shù)。更具體的可以分為血細(xì)胞系涂片和脫落細(xì)胞涂片兩大類。常用的染色方法有羅氏、巴氏和蘇木素-伊紅（HE）法三種。
羅氏染色液包含瑞氏、姬姆薩、瑞氏姬姆薩、迪夫染色液四種，在血細(xì)胞系涂片中廣泛應(yīng)用。巴氏染色液包含EA36、EA50、EA65三種，用于不同脫落細(xì)胞涂片的染色。HE法為使用比較廣泛的常規(guī)染色法。
上述產(chǎn)品在應(yīng)用到不同的細(xì)胞涂片時(shí)，各有所長，較為常用的是羅氏的姬姆薩染色。由于涂片樣本載體各有不同，染色的觀察重點(diǎn)也不同，因此相應(yīng)的涂片處理和染色步驟在實(shí)際應(yīng)用中都會(huì)基于標(biāo)準(zhǔn)步驟略有調(diào)整，以達(dá)到較為符合實(shí)驗(yàn)需求的顯示效果。
標(biāo)準(zhǔn)步驟
新鮮全血或者抗凝血的染色步驟通常會(huì)作為血細(xì)胞系相關(guān)染色產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)步驟。通常為：
1、取5-10ul樣本，推片；
2、室溫晾干貼片；
3、使用甲醇或乙醇固定后染色亦或者直接使用含固定成分的染色液進(jìn)行染色；
4、添加緩沖液稀釋染色液并輔助定色；
5、切片晾干后觀察。
調(diào)整方法
各種提取后重懸的細(xì)胞樣本大多需要對前三步的貼片固定步驟進(jìn)行調(diào)整，這里提供幾種常用的調(diào)整方法：
1
針對成分復(fù)雜的淋巴細(xì)胞分離液提取樣本適當(dāng)離心后，使用1×PBS重懸細(xì)胞避免混懸液成分對細(xì)胞染色產(chǎn)生影響，如背景著色、成膜影響細(xì)胞觀察。
2
1×PBS、細(xì)胞灌洗液以及骨髓沖洗液等相比于全血而言都比較稀，難以涂布成穩(wěn)定形態(tài)，而且晾干產(chǎn)生的鹽析也會(huì)對細(xì)胞形態(tài)產(chǎn)生影響。因此大多使用加醇（5ul樣本加10ul乙醇或甲醇）輔助展片晾干或預(yù)固定（5ul樣本加5ul 10%中性福爾馬林固定液或4%多聚甲醛固定液，固定10-20min）后，畫圈涂片再晾干的形式來制備涂片。
3
需要同時(shí)保障胞核和胞質(zhì)的著色，在有核血細(xì)胞計(jì)數(shù)或腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)過程中顏色對比并不夠清晰，可以通過對第四步稀釋液的種類進(jìn)行更換的形式來強(qiáng)化對核著色和嗜多色紅細(xì)胞的顯示。如：使用1×PBS pH 7.2-7.4替代試劑盒內(nèi)稀釋液或自行購置的pH 6.4-6.8稀釋液進(jìn)行染色后稀釋和定色可以洗脫胞質(zhì)嗜酸性著色，增強(qiáng)胞核的嗜堿性著色。但是，如需保留紅細(xì)胞著色就要嚴(yán)格控制稀釋液的使用。
4
通常細(xì)胞涂片建議直接晾干鏡檢，不建議長期保存。但如需短期保存1周-2個(gè)月亦可晾干后使用中性樹膠進(jìn)行封片保存。
系列產(chǎn)品
版權(quán)所有 ICP備案號: 管理登陸 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 總流量：1055000 網(wǎng)站地圖
