當抗體遇上Protein A/G beads

更新時間：2015-12-28

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當抗體遇上Protein A/G beads
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近遇到一個問題：免疫沉淀后，抗體和Protein A/G beads 交聯(lián)劑是什么？

圖一：未結合抗體

圖二：抗體被共價結合到蛋白A，G上

為了將抗體共價耦聯(lián)到瓊脂固相化的Protein A或G上，這里DSS交聯(lián)劑就發(fā)揮作用了，它的特點有：
? 抗體非共價結合到蛋白 A/G Plus上
? DSS交聯(lián)劑共價結合抗體和蛋白A/G Plus
? 抗體不被洗脫下來

為此，科普了一下交聯(lián)劑相關的信息。

什么是交聯(lián)劑？
交聯(lián)劑是一類小分子化合物，分子量一般在200-600之間，具有2個或者更多的針對特殊基團（氨基、巰基等）的反應性末端，可以和2個或者更多的分子分別偶聯(lián)從而使這些分子結合在一起。在生命科學研究中，巧妙地運用交聯(lián)劑可以使很多工作取得突破。

目前已經被廣泛地應用于：細胞膜結構研究，蛋白質結構研究，蛋白質間相互作用研究，生物daodan研究，載體蛋白與半抗原的連接，蛋白質或其他分子的固相化，抗體的標記，標記轉移，蛋白質與核酸的連接。

如何選擇交聯(lián)劑？

交聯(lián)劑的選擇基于它們的化學反應性（例如：對于特定官能團的專一性）以及其他與預期應用相關的因素，包括：

? 化學特異性

? 間隔臂長度

? 水溶性和細胞膜通透性

? 相同的或不同的反應基團（同雙功能與異雙功能比較）

? 自發(fā)反應或光反應性基團

? 間隔臂是否可被剪切

? 包含可被放射性標記或其他方式標記的部分

活性交聯(lián)劑基團與其官能團靶點

反應基團	官能團靶點
芳基疊氮化物（Aryl Azide）	非選擇性（或伯胺）
碳化二亞胺（Carbodiimide）	胺/羧基（-NH2/-COOH）
zhong氮甲烷（Diazirine）	非選擇性
酰肼（Hydrazide）	醛（-CHO）（氧化的碳水化合物）
羥甲基膦（Hydroxymethyl Phosphine）	胺（-NH2）
亞胺酸酯（Imidoester）	胺（-NH2）
馬來酰亞胺（Maleimide）	巰基（-SH）
鹽乙酸酯（溴代或碘代）（Haloacetate（Bromo- or Iodo-））	巰基（-SH）
N-羥基琥珀酰亞胺酯（NHS-ester）	胺（-NH2）
五氟代苯酯（PFP-ester）	胺（-NH2）
補骨脂素（Psoralen）	DNA和RNA
吡啶基二硫化物（Pyridyl Disulfide）	巰基（-SH）
乙烯基砜（Vinyl Sulfone）	巰基，胺，羥基