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生物緩沖液的主要分類及優(yōu)缺點(diǎn)說明

更新時(shí)間:2019-10-21點(diǎn)擊次數(shù):3692
  產(chǎn)品分類:
 
  1. 磷酸鹽緩沖液
 
  磷酸鹽緩沖液是應(yīng)用廣泛的生物緩沖液。由于其二次離解作用,緩沖液pH值范圍較寬,可配置不同pH值的酸性、堿性和中性緩沖液:
 
  制備酸性緩沖液可直接使用NaH2PO4或KH2PO4, pH值范圍為1~5;
 
  堿性緩沖液可直接使用Na2HPO4或K2HPO4, pH范圍為9~12;
 
  中性緩沖液中含有等量的NaH2PO4和Na2HPO4或等量的KH2PO4和K2HPO4溶液,pH值為5.5~8.5。
 
  優(yōu)點(diǎn):①易于配制成各種濃度 ;②pH值范圍寬;③pH受溫度的影響??;
 
  缺點(diǎn):①易與常見的鈣、鎂、重金屬離子形成沉淀;②抑制某些生化過程;
 
  2. Tris緩沖液
 
  Tris緩沖液在生物化學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用。它是弱堿,通常在“中性”范圍內(nèi)使用。Tris-HCl緩沖:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸緩沖液:pH = 5.0 ~ 9.0。
 
  除TRIS - hcl外,TRIS還有多種衍生化緩沖:
 
  TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用來清洗免疫染色組織或Western blotting中的Western blotting膜;
 
  TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,一種常用于Western Blotting的膜緩沖液;
 
  TE=Tris-HCl+EDTA,對(duì)DNA堿基具有保護(hù)作用,常用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存;
 
  TAE=Tris堿+乙酸+EDTA,是一種廣泛應(yīng)用于短片段DNA電泳的緩沖體系;
 
  TBE=三堿基+硼酸+EDTA,適用于長期DNA電泳,對(duì)小片段有較好的分離效果。
 
  優(yōu)點(diǎn): ①因?yàn)門ris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;②對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
 
  缺點(diǎn):①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;②溫度效應(yīng)大,溫度變化對(duì)緩沖液pH值的影響很大,所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。 ③易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封。④此緩沖液對(duì)某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。
 
  3. Good’s緩沖液
 
  在 1960 年代中期,N.E.Good鑒于一般的緩沖液系統(tǒng)并不適合生化實(shí)驗(yàn)所使用,必須用人為設(shè)計(jì)和人工合成的方法來找到專門用于生命科學(xué)研究的特定的緩沖體系,這些緩沖體系們都具有以下特質(zhì):
 
  1.pKa 在6~8 之間;2.在水溶液中有高溶解度;3.鹽效應(yīng)很小;4.不易被運(yùn)送通過細(xì)胞膜;5.不易受溫度、離子組成、濃度等因素影響解離度;6.不會(huì)與金屬離子形成錯(cuò)合物,或錯(cuò)合物不沉淀、不干擾生物活性;7.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
 
  Good’s緩沖液的主要優(yōu)點(diǎn)是不參加和不干擾生物化學(xué)反應(yīng)過程,對(duì)酶化學(xué)反應(yīng)等無抑制作用,所以它們專門用于細(xì)胞器和極易變性的、對(duì)pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作。
 
  其缺點(diǎn)是:①價(jià)格昂貴,②對(duì)測(cè)定蛋白質(zhì)含量的雙縮脲法和Lowry法不適用,因?yàn)樗鼈儠?huì)使空白管的顏色加深。
 
  4.甘氨酸緩沖液
 
  甘氨酸緩沖液pH值范圍廣,應(yīng)用范圍廣。pH值范圍為2.0~11.0。

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