谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒

一、粗酶液提取：細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)420nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣品測(cè)定（在 EP 中加入下列試劑）：試劑名稱（uL） 測(cè)定管 對(duì)照管樣本 25 蒸餾水 25 試劑一 100 100 試劑二 400 400 混勻，37℃水浴1 小時(shí)試劑三 525 525 混勻，8000 g，25℃離心10 min；取上清液，在EP 管中加入下列試劑上清液 650 650 試劑四 150 150 試劑五 100 100 試劑六 100 100 混勻，420nm 處讀取吸光值 A，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管

三、計(jì)算：

1、 血清（漿）GLS 活性單位定義：每mL 血清（漿）每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS（μmol /min/mL）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA-0.1301)

2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞GLS 活性

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：?jiǎn)挝欢x：每mg 蛋白質(zhì)每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS（μmol /min /mg prot）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr。

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：?jiǎn)挝欢x：每g 組織每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS（μmol /min /g 鮮重）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 樣總) ÷T=363.1×(ΔA-0.1301)÷W。

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算單位定義：每1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。 GLS（μmol /min /10 4 cell）＝363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 樣總)÷T =0.7262×(ΔA -0.1301) V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。 GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率，即可計(jì)算其酶活性。

谷氨酰胺酶(GLS)活性檢測(cè)試劑盒

試劑一×1 瓶，60 mL，4 ℃保存；試劑二×1 瓶，20 mL，4 ℃保存；試劑三×1 瓶，30 mL，常溫保存；試劑四×1 瓶，10 mL，常溫保存；試劑五×1 瓶，6 mL，常溫保存；試劑六×1瓶，6 mL，常溫避光保存。