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內(nèi)毒素去除劑產(chǎn)品簡(jiǎn)介：    

        本公司生產(chǎn)的內(nèi)毒素清除劑主要用于清除 DNA、蛋白質(zhì)或其他液體樣品中的內(nèi)毒素。在特定的 pH 值、 鹽濃度和溫度條件下，內(nèi)毒素清除劑能與 DNA、重組蛋白以及液體樣品中的內(nèi)毒素特異性結(jié)合，經(jīng)過室溫高 速離心后，DNA 或蛋白質(zhì)等保留在水相，而內(nèi)毒素則被濃縮到極小體積的下層相而被清除。經(jīng)過 3 次以上重 復(fù)抽提后可將活性為 5000～50000 EU/ml 的內(nèi)毒素水平降低到 5～0.5 EU/ml 以下，即降低 1000～10000 倍。

內(nèi)毒素去除劑操作步驟：    

       提取前請(qǐng)將內(nèi)毒素清除劑放在冰上冰浴 5min，期間翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次使試劑均勻預(yù)冷。    

1、 a)已純化的質(zhì)粒 DNA 內(nèi)毒素清除：吸取 500μl DNA 溶液于微型離心管，加入 1/10 體積 3M NaAc pH5.2 或 1/20 體積 5M NaCl 溶液，冰浴 5min。   

b)在提取質(zhì)粒 DNA 過程中清除內(nèi)毒素：以堿裂解法提取質(zhì)粒為例，在加入裂解液和中和液并離心去除 碎片之后，吸取含質(zhì)粒 DNA 的上清于新離心管中，冰浴 5min。   

 2、加入 1/5 體積預(yù)冷的內(nèi)毒素清除劑，振蕩混勻，溶液變渾濁。    

3、冰浴 5min，溶液應(yīng)變清亮。    

4、37℃水浴 5min，不時(shí)振蕩，溶液又變渾濁。    

5、12000rpm 室溫離心 5min，溶液應(yīng)分為兩相，上層水相含 DNA，下層油狀相含內(nèi)毒素。    

6、將含 DNA 的上層水相轉(zhuǎn)移到新管，棄油狀相，重復(fù)抽提三次，即重復(fù)步驟 2-6 三次。    

7、加入 2.5 體積無(wú)水乙醇，-20℃沉淀 30min 或過夜；12000rpm 離心 10min，棄上清；加入 70％乙醇洗 滌沉淀，12000rpm 離心 5min 棄上清；空氣干燥沉淀，加入 100～200μl 無(wú)內(nèi)毒素的高純水或 TE 溶解沉淀。    

8、用內(nèi)毒素檢測(cè)試劑測(cè)定樣品中內(nèi)毒素活性，并與初始樣品比較。

注意事項(xiàng)：

1、DNA 濃度>1mg/ml 時(shí)清除內(nèi)毒素效率降低。由于 DNA 和蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)，清除程序可導(dǎo)致 10-20 ％的 DNA 丟失，所幸的是與清除內(nèi)毒素的艱難相比 DNA 更容易提取制備。    

2、所有溶液應(yīng)用無(wú)內(nèi)毒素的高純水配制，所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素，玻璃器皿可高溫烘烤，非揮發(fā) 性水溶液可高壓 120℃高溫處理?。