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當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心細胞生物學(xué)中性粒細胞分離系列P2200猴骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
猴骨髓中性粒細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品簡介

是一種用于從狗猴骨髓中分離中性粒細胞的試劑盒,其主要組成包括試劑A、試劑C、細胞洗滌液、紅細胞裂解液和全血及組織稀釋液。 猴骨髓中性粒細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號:P2200
更新時間:2025-08-08
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:1318
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注意:本產(chǎn)品試劑組分和操作步驟發(fā)生變化,使用前請仔細閱讀說明書。 


保存:本產(chǎn)品對光敏感,應(yīng)該室溫避光儲存,保質(zhì)期 2 年。無菌開封后,保存于室溫。 


試劑盒組成: 

試劑 A 200mL 室溫避光 

試劑 C 100mL 室溫避光 

紅細胞沉降液 100mL 室溫 

細胞洗滌液 200mL 室溫 


操作步驟一: 紅細胞沉降(僅供參考) 

沉降去除紅細胞:取骨髓單細胞懸液與血液稀釋液(注射用生理鹽水或 1×PBS)及紅細胞沉降液按 照 1:1:1 比例混勻,室溫下靜置 30-40min 后,可見紅細胞沉于試管底部,小心吸取上清層(富含白 細胞及血小板)用于后續(xù)細胞分離。 


操作步驟二: 

樣本分離(僅供參考) 

1. 樣本分離:當(dāng)樣本體積小于 5mL 時,先在離心管中先加入 4mL 試劑 A,后將 2mL 試劑 C 小心疊加于試劑 A 之上,形成梯度界面(樣本體 積大于等于 5mL,試劑 A 與試劑 C 比例 2:1,試劑總量等于沉降后樣 本含量),將懸液小心平鋪于分離液液面上方。由于密度差異,可見明 顯的分層界面(注意二者的總體積不能超過離心管的三分之二,否則會 影響分離效果)。 

2. 室溫條件下水平轉(zhuǎn)子 600-1000g ,25-30min(血液體積越大所需離 心力越大,離心時間越長,最佳分離條件需摸索,離心最大轉(zhuǎn)速不超過 1000g)。

3. 離心后,離心管中可見兩個環(huán)狀乳白色層,上層為單個核細胞層,下層即所需中性粒細胞層(受 個體差異及分離條件影響,粒細胞白膜層可能會出現(xiàn)顏色較淺的情況)。 

4. 用吸管吸取下層中性粒細胞白膜層至新的離心管中,加入 10mL 細胞清洗液洗滌細胞,250g,離 心 10min。 

5. 棄上清,加入 5mL 細胞清洗液重懸細胞,250g,離心 5min。 

6. 棄上清,重懸細胞備用。 


骨髓單細胞懸液制備: 

小動物骨髓的采集: 

1. 處死動物,無菌提取股骨和脛骨,剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔(注意盡可能少的剪走骨 髓腔)。 

2. 取 1ml 的無菌注射器,吸取少量的含有 10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀釋液或者是含有血清的培養(yǎng)基,沖 洗骨髓腔以獲得骨髓。 

3. 最終制備成 2×10 8–1×10 9 /ml 的單細胞懸液備用。 

大動物骨髓的采集: 

大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法:先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計好 皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊,右手 將穿刺針在穿刺點垂直刺入,輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入,當(dāng)穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。連 接注射器緩慢抽吸骨髓組織,當(dāng)注射器內(nèi)抽到少許骨髓時即停止抽吸。用含 10%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的稀 釋液調(diào)整細胞濃度為 2×10 8–1×10 9 /ml 的單細胞懸液備用。 

常用的骨髓穿刺點: 

股骨:穿刺部位在股骨內(nèi)側(cè)面,靠下端的凹面處; 

胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處; 

肋骨:穿刺部位是第 5~7 肋骨各點的中點; 

脛骨:穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。

如果穿刺采用的是肋骨,穿刺結(jié)束后要用膠布封貼 穿刺孔,防止發(fā)生氣胸。 


注意事項: 

A.開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產(chǎn)品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免 微生物污染。 

B.分離液使用時應(yīng)始終保持室溫(18℃~25℃),如室內(nèi)溫度較低,可將分離液預(yù)熱。4℃或者是 溫度較低的條件下離心,可能會導(dǎo)致白膜層不清晰。 

C.血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血 2h 以內(nèi)),為保持中性粒細胞的活性,應(yīng)避免冷凍和冷藏。 

D.稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養(yǎng)液,其成分會導(dǎo)致血細胞凝集, 大大降低細胞得率及純度。

E.部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會導(dǎo)致細胞掛壁,影響分離效果。 

F.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會影響分離效果,可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間,摸索 最佳的分離條件。 

G.如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng),注意全程保持無菌操作,避免微生物污染。 

H.不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同,用戶在制定分離液時應(yīng)提 供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。


猴骨髓中性粒細胞分離液試劑盒

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