維生素E檢測試劑盒說明書
分光光度法

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

規(guī)格：50管/24樣

維生素E檢測試劑盒產(chǎn)品組成： 提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。 試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。 試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。 試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明： 維生素E（VitaminE）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中主要的抗氧 化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細胞膜的完整性和正常 功能，具有延緩衰老、預防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應用 價值。 VE還原Fe3+為Fe2+，F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡合物，在530nm有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、漩渦震蕩儀。

操作步驟：

一、樣本處理 1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g，加入1mL提取液） 加入提取液，充分勻漿后用提取液定2mL，在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃， 5000g離心10min， 取上層測定。 2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬細胞加 入2mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；在漩 渦混勻儀上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測定。 3. 血清：取0.2mL，加1.9mL提取液，漩渦儀混勻上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層 測定。

二、測定操作 對照管 測定管 樣品（μL） 500 500 試劑一（μL） 100 100 試劑二（μL） 100 試劑三（μL） 100 充分混勻，25℃反應 5min 試劑四（μL） 300 300 充分混勻，于 1mL 玻璃比色皿，無水乙醇調(diào)零，測定 530nm 處吸光值，記 為 A 對照管和 A 測定管，△A=A 測定管-A 對照管。

三、計算公式
標準曲線：y=0.022x+0.0065， R2=0.9978 1. 按照蛋白含量計算 VE含量（μg/mgprot）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷（V樣×Cpr） =181.8×（△A-0.0065）÷Cpr 2. 按照樣本質(zhì)量計算 VE含量（μg/g）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷（V樣×W÷V樣總） =181.8×（△A-0.0065）÷W 3. 按照細胞數(shù)量計算 VE含量（μg/104 cell）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總） =181.8×（△A-0.0065）÷ 細胞數(shù)量 4. 按照液體體積計算 VE含量（μg/mL）=（△A-0.0065）÷0.022×V反總÷V樣×20 =1818×（△A-0.0065） V反總：反應總體積，1mL；：V樣：加入樣本體積，0.5mL；V樣總：加入提取液體積，2mL； Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g 注意事項： 1. 若反應體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進行適當?shù)南♂?，并在計算公式中乘以稀釋倍?shù)。 2. 低檢出限為 29.5μg/g。